معلومة

هل هناك تحسين للنسخ العكسي للنصوص الطويلة التي تبلغ 9 كيلوبايت؟

هل هناك تحسين للنسخ العكسي للنصوص الطويلة التي تبلغ 9 كيلوبايت؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

هل قام أي شخص بتحسين RT للنصوص الطويلة (9 كيلوبايت)؟ سيكون تطبيق المصب هو تضخيم PCR وإعداد مكتبة Illumina. سيكون من التافه صنع مجموعات بادئات داخلية لـ PCR محددة طالما لا توجد تسلسلات خيمرية. إذا كان هناك ، فمن المحتمل أن يستعدوا أيضًا. إذا كان أي شخص يعرف بالتحسين و / أو المخاطر المحتملة الأخرى ، فأنا أحب أن أسمعهم.


يجب أن يكون RT-PCR قادرًا على الحصول على ما يصل إلى 10 كيلوبايت تقريبًا. إذا وجدت أنها لا تعمل ، فيمكنك استخدام مجموعات RT-PCR طويلة المدى تجارياً (انظر إلى Stratagene و Qiagen ، على سبيل المثال). يمكن لـ Qiagen معالجة ما يصل إلى 12.5 كيلو بايت في نظام RT-PCR من خطوتين.


مع التسلسلات الأطول ، تصبح dNTPs محدودة. حاول إضافة المزيد من dNTPs مع الحفاظ على مقدار التمهيدي كما هو. لا تخف من إجراء عدة تفاعلات بكميات مختلفة من الكاشف للعثور على الكمية المثلى. أيضًا ، قم بزيادة وقت رد الفعل. تحتاج النسخة العكسية وبوليميراز الحمض النووي إلى مزيد من الوقت لتغطية نسخة أطول.


هل هناك تحسين للنسخ العكسي للنصوص الطويلة ، 9 كيلوبايت؟ - مادة الاحياء

للحصول على أفضل تجربة تصفح ، يرجى الترقية إلى متصفح ويب حديث.

سياسة ملفات تعريف الارتباط الخاصة بـ Promega

نحن نستخدم ملفات تعريف الارتباط والتقنيات المماثلة لجعل موقعنا يعمل ، وتشغيل التحليلات ، وتحسين موقعنا ، وعرض المحتوى والإعلانات المخصصة لك. بعض ملفات تعريف الارتباط هذه ضرورية لكي يعمل موقعنا الإلكتروني. بالنسبة للآخرين ، فزنا و rsquot وضعناهم ما لم تقبلهم. لمعرفة المزيد حول ملفات تعريف الارتباط وكيفية إدارة ملفات تعريف الارتباط ، اقرأ سياسة ملفات تعريف الارتباط الخاصة بنا.

إذا كنت مقيمًا في المنطقة الاقتصادية الأوروبية أو المملكة المتحدة أو سويسرا ، فيمكنك تغيير إعداداتك في أي وقت عن طريق النقر فوق إدارة الموافقة على ملفات تعريف الارتباط في تذييل موقعنا على الويب.

موقعنا لا يدعم متصفحك بشكل كامل.

لقد اكتشفنا أنك تستخدم إصدارًا أقدم من Internet Explorer. قد تكون تجربتك التجارية محدودة. الرجاء تحديث المستعرض الخاص بك إلى Internet Explorer 11 أو أعلى.


مقدمة

تم تحديد النسخ العكسية (RTs) ، والمعروفة أيضًا باسم بوليميراز الحمض النووي الريبي الموجه ، لأول مرة في الفيروسات القهقرية (1) (2). بالإضافة إلى الدور الحاسم الذي تلعبه هذه الإنزيمات في مجموعة متنوعة من الأمراض البشرية الرئيسية (فيروس نقص المناعة البشرية والتهاب الكبد وبعض أنواع السرطان) ، تعد RTs مكونًا أساسيًا في مجموعة أدوات عالم الأحياء الجزيئية. يعتبر نشاط RT أمرًا بالغ الأهمية للعديد من التقنيات الأساسية بما في ذلك RT-PCR في الوقت الفعلي ونقطة النهاية ، وتوليد المسبار المسمى للمصفوفات الدقيقة واستنساخ (كدنا). إن إنزيم النسخ العكسي المثالي قوي (نشط للغاية في ظل مجموعة متنوعة من الظروف) ويحول جميع الحمض النووي الريبي الجاهز داخل عينة إلى (كدنا) ، بغض النظر عن وفرته أو طوله أو هيكله الثانوي.

أكثر RTs تميزًا المستخدمة في البيولوجيا الجزيئية هي RTs الفيروسية: فيروس ورم أرومات نخاع العظم (AMV) وفيروس سرطان الدم Moloney Murine (MMLV). أدت الهندسة الوراثية وتطوير المخازن المؤقتة المعززة لـ RT إلى التوافر التجاري للإنزيمات الجديدة التي تقدم أداءً فائقًا على RTs التي تحدث بشكل طبيعي.

أجرينا مقارنة وجهًا لوجه لخمسة علامات تجارية مشهورة من RTs: GoScript ™ (Promega Cat. # A5003) ، SuperScript® II و SuperScript® III (Invitrogen Cat. # 18064 و 18080 ، على التوالي) ، و Omniscript® و Sensiscript® (Qiagen Cat. # 205113 و 205213 ، على التوالي) النسخ العكسية. قارنا هذه RTs الخمسة لفائدتها في اكتشاف نصوص التتبع بواسطة PCR في الوقت الحقيقي ، والقدرة على نسخ RNA طويل والحساسية للإيثانول ، وهو ملوث شائع في مستحضرات RNA. قمنا أيضًا بمقارنة النسخ العكسية SuperScript® III و GoScript® لقدرتها على نسخ مرنا غني بال GC.


المقدمة

تعد الأشكال المتعددة للنيوكليوتيدات المفردة (SNPs) والطفرات النقطية أكثر أنواع تعدد الأشكال الجيني شيوعًا (1) ، وقد تم استغلالها على نطاق واسع كعلامات مهمة في التطبيقات الطبية الحيوية المتنوعة (2). تفاعل البلمرة المتسلسل الخاص بالأليل (AS-PCR) وتعديلاته ، والتي تستند إلى عدم قدرة بوليميراز الدنا على تمديد التمهيدي غير المتطابق ، كانت شائعة في اكتشاف متغيرات النوكليوتيدات المفردة نظرًا لقوتها وبساطتها (3– 24). ومع ذلك ، عادة ما يكون AS-PCR انتقائية متواضعة بسبب التضخيم المتقاطع الكبير. على الرغم من أنه يمكن تحقيق انتقائية أفضل في بعض فحوصات الكشف عن الطفرات ، إلا أنه يبدو أنها تعتمد على التسلسل المحلي ونوع تعدد الأشكال (25) ، وبالتالي لا يمكن تعميمها على فحوصات الكشف عن الطفرات المختلفة. علاوة على ذلك ، يتطلب تحليل متغيرات الحمض النووي الريبي بواسطة AS-PCR والتقنيات الحالية ، في بداية الإجراء ، خطوة إضافية لتحويل الحمض النووي الريبي بشكل غير محدد إلى (كدنا) قبل اكتشاف الطفرة المستندة إلى الحمض النووي (26-28) ، والذي يتضمن عادةً خطوات تضخيم الحمض النووي المستهدف ، تفاعل تمييز الأليل والكشف عن المنتجات الخاصة بالأليل (29).

على النقيض من AS-PCR ، فإن التمهيد الخاص بالأليل أثناء النسخ العكسي سيسمح من حيث المبدأ بالتحويل المباشر لمتغيرات RNA المتشابهة للغاية إلى منتجات خاصة بأليل يمكن تمييزه في خطوة واحدة ، لذلك ، كان من المتوقع منذ فترة طويلة أن يكون بديلاً واعدًا لـ تحليل متغيرات الحمض النووي الريبي. ومع ذلك ، أظهر الباحثون الرائدون أن النسخ العكسية يمكن أن تبدأ بتمديد التمهيدي من التمهيدي غير المتطابق بكفاءة عالية بما فيه الكفاية (30 ، 31) ، مما يؤدي إلى مستوى كبير من عدم التطابق في التمهيد. بسبب هذه العقبة ، كان التمهيد الخاص بالأليل أثناء النسخ العكسي حتى وقت قريب بعيد المنال بالانتقائية المناسبة. تم وصف عدد قليل من الأساليب لتقليل عدم التطابق أثناء النسخ العكسي باستخدام تحقيقات الحجب التنافسي "غير القابلة للتمديد" ، ولكن هذه الأساليب لا تزال تعاني من انتقائية منخفضة نسبيًا (32) ، مما يحد من فائدتها الواسعة في إعدادات مختلفة.

في هذا التقرير ، نصف الإستراتيجية الأولى التي تستخدم مسبار حجب تنافسي "قابل للتمديد" في النسخ العكسي (ExBP-RT) لتحقيق تمهيد خاص بالأليل مع انتقائية فائقة ، مما يتيح الكشف الدقيق والقياس الكمي لمتغيرات الحمض النووي الريبي. في إستراتيجية ExBP-RT ، يتم تحضير قالب RNA المتحول بشكل انتقائي أثناء النسخ العكسي بواسطة التمهيدي الخاص بالطفرة ، والذي يقترن بتوقيع فريد في نهايته 5 لدعم اكتشاف / تمييز المنتجات الخاصة بالأليل في الخطوة التالية . الأهم من ذلك ، أن عدم التوافق مع قالب RNA من النوع البري الأكثر وفرة يتم قمعه بشكل كبير بواسطة مسبار الحجب التنافسي القابل للتمديد من النوع البري باستخدام بروتوكول البدء السريع في النسخ العكسي.

ExBP-RT هي استراتيجية عالمية بسيطة للكشف عن الطفرات في عينات الحمض النووي الريبي فائقة الحساسية ، علاوة على ذلك ، فهي تتيح التحديد الدقيق لمستويات الحمض النووي الريبي للطفرات المعبر عنها ، والتي قد تعكس النتائج الوظيفية التي تتعرض لها الخلايا أو الأنسجة بشكل أكثر إخلاصًا من الحمض النووي. مقايسة الكشف عن الطفرة على أساس (33). ستوفر هذه الإستراتيجية أداة بحث ملائمة للدراسات اللاجينية لتحليل التعبير الجيني الخاص بالأليل (34 ، 35) ، تحرير الحمض النووي الريبي (36) بالإضافة إلى الكشف عن طفرات الحمض النووي الريبي داخل جينومات الحمض النووي الريبي الفيروسي مثل الطفرات التي تمنح مقاومة الأدوية في فيروس نقص المناعة البشرية والإنفلونزا. الفيروسات (20 ، 37).


تطبيق [تحرير | تحرير المصدر]

يوفر التضخيم الأسي عبر تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي تقنية عالية الحساسية يمكن من خلالها اكتشاف عدد نسخ منخفض جدًا من جزيئات الحمض النووي الريبي. يستخدم RT-PCR على نطاق واسع في تشخيص الأمراض الوراثية ، وبشكل دلالي ، في تحديد وفرة جزيئات مختلفة من الحمض النووي الريبي داخل الخلية أو الأنسجة كمقياس للتعبير الجيني.

طرق البحث [عدل | تحرير المصدر]

يشيع استخدام RT-PCR في طرق البحث لقياس التعبير الجيني. على سبيل المثال ، Lin et al. تستخدم qRT-PCR لقياس التعبير عن جينات Gal في خلايا الخميرة. أولاً ، لين وآخرون. مهندس طفرة في بروتين يشتبه في مشاركته في تنظيم جينات Gal. تم افتراض أن هذه الطفرة تلغي بشكل انتقائي تعبير جال. لتأكيد ذلك ، تم تحليل مستويات التعبير الجيني لخلايا الخميرة التي تحتوي على هذه الطفرة باستخدام qRT-PCR. تمكن الباحثون من تحديد أن طفرة هذا البروتين التنظيمي قللت من تعبير Gal. & # 9140 & # 93 تحليل اللطخة الشمالية يستخدم لدراسة التعبير الجيني للحمض النووي الريبي بشكل أكبر.

إدراج الجينات [عدل | تحرير المصدر]

يمكن أيضًا أن يكون RT-PCR مفيدًا جدًا في إدخال جينات حقيقية النواة في بدائيات النوى. نظرًا لأن معظم الجينات حقيقية النواة تحتوي على إنترونات ، والتي توجد في الجينوم ولكن ليس في mRNA الناضج ، فإن cDNA الناتج عن تفاعل RT-PCR هو تسلسل الحمض النووي الدقيق (بغض النظر عن الطبيعة المعرضة للخطأ في النسخ العكسية). تترجم مباشرة إلى بروتين بعد النسخ. عندما يتم التعبير عن هذه الجينات في خلايا بدائية النواة من أجل إنتاج البروتين أو تنقيته ، فإن الحمض النووي الريبي المنتج مباشرة من النسخ لا يحتاج إلى التضفير لأن النسخة تحتوي على exons فقط. (تفتقر بدائيات النوى ، مثل الإشريكية القولونية ، إلى آلية ربط الرنا المرسال في حقيقيات النوى). يستخدم RT-PCR بشكل شائع في دراسة جينومات الفيروسات التي تتكون جينوماتها من RNA ، مثل Influenzavirus A والفيروسات القهقرية مثل فيروس نقص المناعة البشرية.

تشخيص الأمراض الجينية [عدل | تحرير المصدر]

يمكن استخدام RT-PCR لتشخيص الأمراض الوراثية مثل متلازمة ليش نيهان. ينتج هذا المرض الوراثي عن خلل في جين HPRT1 ، والذي يؤدي سريريًا إلى حصوات البول المميتة لحمض البوليك وأعراض مشابهة لمرض النقرس. سيكشف تحليل الأم الحامل والجنين لمستويات تعبير الرنا المرسال لـ HPRT1 ما إذا كانت الأم حاملة للجنين وما إذا كان من المرجح أن يصاب الجنين بمتلازمة ليش نيهان. & # 9141 & # 93

كشف السرطان [عدل | تحرير المصدر]

يعمل العلماء على طرق لاستخدام RT-PCR في اكتشاف السرطان للمساعدة في تحسين التشخيص ومراقبة الاستجابة للعلاج. تنتج الخلايا السرطانية المنتشرة نسخًا فريدة من الرنا المرسال اعتمادًا على نوع السرطان. الهدف هو تحديد نسخ mRNA التي تعمل كأفضل العلامات الحيوية لنوع معين من الخلايا السرطانية ثم تحليل مستويات التعبير باستخدام RT-PCR. & # 9142 & # 93

يستخدم RT-PCR بشكل شائع في دراسة جينومات الفيروسات التي تتكون جينوماتها من RNA ، مثل Influenzavirus A والفيروسات القهقرية مثل فيروس نقص المناعة البشرية.


مناقشة

توفر فحوصات RT-LATE-PCR في شكل خطوة واحدة وسيلة موثوقة وحساسة للكشف عن الكائنات المسببة للأمراض في كل من المختبر والميدان. تصف هذه الدراسة تطبيق هذه التقنية التشخيصية للكشف عن مرض الحمى القلاعية (FMDV) الذي يشكل أكبر خطر اقتصادي على الماشية المستأنسة. لقد أظهرنا أن متغيرات تسلسل FMDV يمكن اكتشافها بسهولة باستخدام الاشعال التي تتهجين لتسلسل محفوظ للجين ثلاثي الأبعاد ، بالإضافة إلى مسبار متسامح مع عدم التطابق والذي يرتبط بطريقة تعتمد على درجة الحرارة بتسلسل أكثر تنوعًا داخل amplicon. لا يمكن استخدام مثل هذه المجسات مع تقنيات PCR التقليدية التي تستخدم تركيزات متساوية من التمهيدي ، لأن خيوط المنتج تتهجين مع بعضها البعض وتمنع التهجين باستخدام مسبار غير متطابق. وهكذا ، يتغلب RT-LATE-PCR إلى حد كبير على التحدي المتمثل في تقلب التسلسل المتأصل في فيروسات الحمض النووي الريبي.

تُظهر نتائجنا أيضًا أن RT-LATE-PCR بخطوة واحدة يمكن أن تولد بكفاءة أمبليكونات DNA أحادية الجديلة يمكن قياسها عند نقطة النهاية بدلاً من الوقت الفعلي. يتيح ذلك تحسين خطوات التدوير الحراري للتضخيم دون الحاجة إلى ضبط ظروف التهجين واكتشاف المسبار. وبالتالي ، يمكن تقصير خطوات التلدين والتمديد لـ PCR ، مما يقلل غالبًا من التضخيم غير المحدد ويحسن إمكانية تكرار نتائج الفحص. يمكن استخدام تحليل الذوبان لتأكيد تضخيم العامل المشتبه به ، وفي بعض الحالات تقديم معلومات إضافية بشأن تحديد السلالة.

تعد بروتوكولات RT-PCR ذات الخطوة الواحدة ملائمة ، ولكنها تنطوي على خطر تأخير الاكتشاف أو أقل حساسية مقارنة بالبروتوكولات ذات الخطوتين ، لأنه لا يمكن تحسين النسخ العكسي وتضخيم PCR بشكل منفصل (Nolan وآخرون. 2006 ، هارتشورن وانغ ، 2010). أدى استخدام Tfi polymerase ، بدلاً من Taq polymerase إلى تحسين بروتوكول الخطوة الواحدة بشكل كبير ، ويفترض أن Tfi polymerase متوافق مع dithiothreitol والمواد الكيميائية الأخرى اللازمة لتثبيت SuperScript III. هذه المثبتات نفسها تمنع بوليميراز Taq ، لكن حذفها يؤدي إلى نسخ عكسي أقل قوة. بالإضافة إلى ذلك ، قدمنا ​​خطوة ما قبل الحضانة في درجة حرارة الغرفة ، قبل إضافة الكواشف للنسخ العكسي و PCR ، حيث يتم تهجين LATE-PCR من البادئات مع تسلسل RNA المستهدف في مخزن مؤقت به تركيز ملح منخفض. سبق وصف استخدام الحضانة المسبقة في درجات حرارة مرتفعة لتحسين نتائج RT-PCR (كأس وآخرون.1989 سميث وآخرون. 1992). لكن درجات الحرارة الموصى بها عادة ما تكون أعلى بكثير من درجة حرارة انصهار المواد الأولية إلى أهدافها من الحمض النووي الريبي ، خاصة إذا كانت المغنيسيوم أو الأملاح الأخرى غائبة أو بتركيزات منخفضة أثناء خطوة ما قبل الحضانة. وبالتالي ، لا يتم تهجين المواد الأولية لاستهدافها خلال فترة الحضانة السابقة ، ويمكن للبنية الثانوية لأهداف الحمض النووي الريبي الإصلاح مع خفض درجة الحرارة. لحسن الحظ ، عادةً ما تتمتع الهجينة بين الجزيئات الخاصة بالبادئات وأهداف RNA باستقرار أكبر من دبابيس الشعر ، وسيحدث التهجين عمومًا إذا كانت درجة حرارة الحضانة أقل من تيم. وتجدر الإشارة إلى أن تسلسل الحمض النووي الريبي للتحكم في HCV المستخدم هنا مأخوذ من 5 ′ UTR للجينوم الفيروسي وله بنية مطوية بدرجة عالية في درجة حرارة الغرفة. ومع ذلك ، تظهر نتائجنا بوضوح أن التمهيدي و HCV RNA يتهجين أثناء الحضانة المسبقة في المخزن المؤقت منخفض الملح.

في معظم الدراسات ، يتم إجراء النسخ العكسي لمدة 15-30 دقيقة. وجدنا أنه يمكن تقصير الوقت إلى 5 دقائق أو أقل ، عند استخدام درجة حرارة منخفضة قبل الحضانة. ربما تم أيضًا تمكين خطوة النسخ العكسي المختصرة من خلال النشاط المحسّن لـ SuperScript III في المخزن المؤقت لتفاعل بوليميريز Tfi. كانت حضانة RT لمدة 90 ثانية كافية للحصول على مستويات شبه قصوى من HCV (كدنا) ، على النحو المحدد من قبل جتي القيم. تعتبر خطوة RT المختصرة مهمة ، ليس فقط لتوفير تشخيص أسرع ، ولكن للحد من سوء التشغيل أثناء تلك الخطوة وتقديم نتائج أكثر اتساقًا. يمكن أن تشتمل أحداث التهيئة الخاطئة على تكوين ثنائي البادئ بواسطة Tfi polymerase أو بواسطة نشاط DNA polymerase المعتمد على DNA في Superscript III.

حددت الاختبارات الموصوفة هنا بنجاح الحمض النووي الريبي من سلالات مختلفة من FMDV تم اختيارها لتغطية التباين الجيني في منطقة الجين ثلاثي الأبعاد الذي يتهجين مع المسبار المتسامح مع عدم التطابق. تشمل الخطوات النهائية في تطوير مقايسة LATE-PCR panFMDV الاختبارات المعملية للعينات الفيروسية من مجموعة واسعة من السلالات التي تغطي جميع الأنماط المصلية السبعة ، والاختبار الميداني في BioSeeqII ، وهو جهاز محمول ينفذ كلاً من تحضير العينة و RT-LATE - PCR لتشخيص "نقطة الرعاية" للحمى القلاعية في الميدان. هذه الاختبارات جارية.

يجب أن تجعل الطبيعة المتسامحة غير المتطابقة لتحقيقات LATE-PCR والقدرة على استخدام الاشعال المقيدة المتعددة من الممكن تصميم مقايسة FMDV الخاصة بالنمط المصلي. مثل هذا الاختبار من شأنه أن يوفر معلومات مهمة لاختيار اللقاح واحتواء المرض وعلم الأوبئة. يمكن إضافة مجسات إلى اختبار panFMDV لتحديد تسلسلات إضافية داخل الجين ثلاثي الأبعاد ، ولكن من غير المرجح أن تسفر هذه الاستراتيجية عن معلومات كافية لتمييز جميع الأنماط المصلية والسلالات بشكل لا لبس فيه لأن التسلسلات في هذه المنطقة لا تجمع عادةً على أساس النمط المصلي. بدلاً من ذلك ، يمكن تضخيم جين الغلاف الفيروسي 1D بتضمين مسبار حد إجماعي مختلف ومسبار متسامح مع عدم التطابق لكل نمط مصلي في تركيبة مع بادئة زائدة مفردة للجينات 2A / B المجاورة ، والتي لها تسلسل محفوظ نسبيًا. النتائج الأولية باستخدام هذا التصميم مشجعة (بيرس وانغ ، غير منشورين).


ادوات

  • RNA (مخزون ، حوالي 1 ميكروغرام / ميكرولتر)
  • RT-PCR Ready Mix (QR0200) الكمية
  • الماء من الدرجة PCR: يستخدم الماء بدرجة PCR (W1754 أو W4502) ك 20 مل من قسامات التجميد قسامة جديدة لكل تفاعل.
  • مخزون تركيز البادئات الأمامية والعكسية (10 ميكرومتر من مخزون العمل مناسب للاستخدام في التفاعلات الفردية بينما 100 ميكرومتر من الأسهم العاملة مناسبة للاستخدام في تفاعلات تعدد الإرسال).
  • تحقيقات الكشف عن الهدف المحددة (تصميم مقايسة PCR / qPCR / dPCR) مخزونات مركزة (10 ميكرومتر من مخزون العمل مناسب للاستخدام في التفاعلات الفردية بينما 100 ميكرومتر من مخزون العمل مناسب للاستخدام في تفاعلات تعدد الإرسال).
    • يمكن طلب oligos المخصص في oligos.

    الملخص

    في الثدييات ، كانت دراسة التعبير الجيني في الجنين السابق للانغراس صعبة لأن الإجراءات القياسية المستخدمة لتحديد كمية الرنا المرسال تتطلب عمومًا كميات كبيرة من مادة البداية. إن تطوير البروتوكولات باستخدام الاستراتيجيات الكمية المختلفة التي تتضمن بشكل عام تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) قد وفر أدوات جديدة لاستكشاف التعبير الجيني في أجنة ما قبل الانغراس. ومع ذلك ، فإن استخدام معيار داخلي ، غالبًا ما يشار إليه باسم جين التدبير المنزلي ، ضروري لتطبيع مستويات الرنا المرسال. تم قياس مستويات الحمض النووي الريبي لثمانية جينات التدبير المنزلي باستخدام PCR في الوقت الفعلي طوال فترة ما قبل الزرع للجنين البقري للعثور على الجين الأنسب لاستخدامه كمعيار. كان هيستون H2a هو أفضل معيار داخلي لأن مستويات النسخ كانت ثابتة عبر فترة ما قبل الزرع. تم تقييم التضخيم الخطي للحمض النووي الريبي المضاد باستخدام المروج T7 للنسخ في المختبر لمجموعة الحمض النووي الريبي بأكمله كطريقة مناسبة لتوسيع مادة البداية قبل التحديد الكمي وكانت فعالة في توفير ملفات تعريف وفرة الحمض النووي الريبي الدقيقة طوال فترة ما قبل الزرع. ومع ذلك ، يبدو أن التضخيم يعتمد على القالب لأن عوامل التضخيم كانت أعلى لبعض الجينات.


    الأمريكتان

    سيتم عرض الموقع باللغة الإنجليزية.

    نحن نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لضمان عمل موقعنا بشكل آمن وسليم ، فهي ضرورية لعمل خدماتنا ولا يمكن إيقاف تشغيلها في أنظمتنا. عادةً ما يتم تعيينها فقط استجابةً للإجراءات التي اتخذتها والتي ترقى إلى مستوى طلب الخدمات ، مثل تسجيل الدخول أو استخدام عربة التسوق أو ملء النماذج. يمكنك ضبط متصفحك لحظر ملفات تعريف الارتباط هذه أو تنبيهك بها ، لكن بعض أجزاء خدماتنا لن تعمل بدونها. مثل ملفات تعريف الارتباط الأخرى التي نستخدمها ، قد تكون ملفات تعريف الارتباط الضرورية للغاية إما ملفات تعريف ارتباط الطرف الأول أو ملفات تعريف ارتباط الطرف الثالث.

    نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتذكر إعداداتك وتفضيلاتك. على سبيل المثال ، قد نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتذكر تفضيلات اللغة الخاصة بك.
    السماح بملفات تعريف الارتباط المفضلة

    نحن نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لجمع معلومات حول كيفية تفاعلك مع خدماتنا ولمساعدتنا في قياسها وتحسينها. على سبيل المثال ، قد نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتحديد ما إذا كنت قد تفاعلت مع صفحة معينة.
    السماح بملفات تعريف الارتباط الخاصة بالأداء / الإحصائيات

    نحن وشركاؤنا الإعلانيون نستخدم ملفات تعريف الارتباط هذه لتقديم الإعلانات ، وجعلها أكثر صلة وذات مغزى بالنسبة لك ، ولتتبع كفاءة حملاتنا الإعلانية ، سواء على خدماتنا أو على مواقع الويب الأخرى ووسائل التواصل الاجتماعي.
    السماح بملفات تعريف الارتباط التسويقية


    معلومات تكميلية

    ملخص التقارير

    الجداول التكميلية

    الجدول التكميلي 1: معلمات الربط من تجارب SPR. الجدول التكميلي 2 أ: قائمة النصوص المخصبة بشكل كبير للريبوسومات معدة SMN. الجدول التكميلي 2 ب: قائمة النصوص التي تعرض تغييرات كبيرة في شغل الريبوسوم النشط في SMA. الجدول التكميلي 2 ج: إحصاءات البيانات ورسم الخرائط من جميع تحليلات RNA-seq للتحكم العقلي وفي مرحلة SMA المبكرة الأعراض. الجدول التكميلي 3: قائمة الجينات المخصبة بشكل كبير للريبوسومات معدة SMN مع تعديلات كبيرة في إشغال الريبوسوم النشط في SMA. الجدول التكميلي 4: قائمة الاشعال لاستنساخ 5 ′ UTR والزخارف الخاصة بـ SMN. الجدول التكميلي 5: قائمة الاشعال لـ ddPCR و RT-qPCR. الجدول التكميلي 6: قائمة الاشعال لتنميط الريبوسوم.


    شاهد الفيديو: المحاضرة الرابعة تكرار ألجين حسب قاعدة هاردي وينبرج والعوامل المؤثرة على التكرار الجيني (يونيو 2022).


تعليقات:

  1. Fekus

    أنت غارقة فيه))))

  2. Alfred

    برافو ، هذه العبارة العظيمة ستكون مفيدة.

  3. Nazshura

    اقرأ ، بالطبع ، بعيدًا عن موضوعي. لكن ، مع ذلك ، من الممكن التعاون معك. ما هو شعورك حيال إدارة الثقة؟

  4. Nekazahn

    فكرتك مفيدة

  5. Dobei

    أعتقد أنك مخطئ. أقترح مناقشته. أرسل لي بريدًا إلكترونيًا في PM ، سنتحدث.

  6. Dorin

    أعتقد أنك مخطئ. أقترح مناقشته.



اكتب رسالة